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对魏于全论文中浓度使用和组织学图的四点疑问

作者：NO

   1. 在中华肿瘤杂志一文中, 两处提到 "皮下接种1x10^4 ~1x10^6 B16 黑色
素瘤细胞", 究竟是多少细胞 ? 这是一个非常重要的数据, 想必做过这个实验的
话, 一定有一个确定值. 如是在这个范围内随意接种的话, 变异太大, 每组又只
有 10只小鼠, 恐怕很难进行组间比较. 已注意到魏院士在回答方舟子时提到了 
5x10^4细胞, 但不知此数据从何来?

   2. 在Nature Medicine一文的免疫组化和流式细胞染色中, 抗血清( 一抗)的
浓度分别描述成 1:50-1:2,000和1:50-1:3,000. 究竟用的是什么浓度? 我觉得
这并不是什么商业秘密, 如果认真做了这个染色, 一定有一个确定值, 应在论文
中写清楚, 这基本上也是行规, 总不可能在这个范围内随意用. 只有买抗体时在 
Data sheet中给你一个象这样的推荐浓度范围, 每个实验室要自行摸出一个最佳
浓度. 另外, 从Western 使用1:100的浓度来看, 在免疫组化即使是用给出的最高
浓度1:50 恐怕也难做出来, 一般来说要高于 Western 的10 倍. 1:2,000几乎是
在开玩笑 .

　　3.做过肿瘤微血管密度 (MVD) 观察和分析的人都知道, 大部分新生的血管
都是不规则状, 即只见内皮细胞不见明显管腔. 象Fig5a 中如此规则带有管腔的, 
在所有新生血管中应不超过 10%. 而此图中所有免疫染色阳性的都是规则的管腔, 
至少说明此免疫反应不在新生的毛细血管. 成型的小血管内皮细胞的特性按理应
更接近荷瘤宿主的内皮细胞 , 但Fig5c 肾组织中内皮细胞完全阴性, 真不得其解. 
难道此抗体高度特异性选择肿瘤的新生的成型的小血管的内皮细胞? 此可能性似
乎甚微. 即使是, 此处显示免疫阳性的血管应不到总血管量的 1/10 (大部分内
皮细胞呈阴性), 就算全部消灭, 对肿瘤的生长应不会有太大的影响.

　　4.再看免疫组化方法, 没有提到blocking, 也没有提到是否用了第二抗体. 假
设都用了, 否则就没有讨论下去的必要了. 那么用的是什么二抗呢? 必定是抗 
mouse的, 问题来了, 这一抗体能与任何 mouse的IgG 结合, 在较大的血管壁经
常有血液的 IgG什么的沉积残留, 即使不用一抗, 也会出现阳性反应 (Fig5d?). 
但这可不是此文所要的特异性免疫反应.

(XYS20060405)

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