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　　再论链霉素残留问题并答赵利军

　　作者：桂铭

　　多谢网友郭发德(Godfather)的讨论，因为丘小庆使用的蛋白纯化柱
CM-sepharose column是弱阳离子交换柱（吸附阳离子）。理论计算colicin Ia
的pI是9.16，融合蛋白是9.03,在pH9的条件下仅带0.4个正电荷。这样的话，蛋
白的确结合不牢固，容易被洗脱丢失。链霉素在pH9.0的条件下带正电荷，可以
被带负电荷的交换柱吸附，并很可能随蛋白的洗脱而洗脱，残留在蛋白溶液里。

　　但是，丘的早期文章也是用相同的条件制备colicin Ia，虽然条件不理想，
但是他应该还是得到了产品。

　　另外，上交换柱之前如果做了充分透析，链霉素的残留仍然应该非常低。在
pH9的条件下，目标蛋白和链霉素都带相同的正电荷，应该不会结合，也就是应
该很容易在透析过程中被分开。张杰说：80－100ml破菌上清液加入数克硫酸链
霉素后，在半小时至一小时搅拌中析出大量DNA－硫酸链霉素沉淀物，离心去除
沉淀物后装入透析分子量15，000的透析袋（硫酸链霉素分子量1，450左右），
经两次各5000ml透析液透析16小时(XYS20060116)。丘小庆说，经第一次沉淀离
心后，“300ml上清液中还残留600mg链霉素” (XYS20060118)。

　　300 ml经过两次各5000ml透析，链霉素将会被稀释近310倍，以600mg的原浓
度看，最后300ml中链霉素应该只剩1.9 mg。就算以赵利军说的那样，“丘小庆
在200ML的细菌裂解液上清中加入12克链霉素(一般是3克)” (XYS20060123)，仅
仅两次透析后（不包括离心除去DNA-链霉素沉淀），200ml中也应该只剩17.7mg。
最终洗脱体积是30ml (XYS20060118),交换柱即使富集了残留的链霉素，只有
0.58 mg/ml，仍然不应该达到4.6mg/ml的程度。如果操作正确的话，透析袋去除
小分子无机物是很有效率的。当然，我们不知道在具体操作过程中，会有什么别
的失误。

　　药物作用的特异性与浓度关系，是说药物在某一浓度范围内可以对某种事物
（菌）的某一特性发挥比较专一的作用，超过这个浓度范围，有可能发挥其他的
作用。丘用游离的AgrD1来拮抗过PH-SA的作用，显示其是通过AgrD1的特异识别
来发挥作用的(Fig4c)。这对PH- SA作用的特异性，是一个很好的说明。

　　说某种细菌对某种药物耐药，并不意味就不能被该种药物杀灭，这是相对于
其作用浓度而言的。链霉素对MRSA有一定的MICs值，并不奇怪。请参考
http://www.cnaho.com/onlinehelp/medic_help.asp

　　丘说：该制备中抗菌多肽含量为1mg/ml左右(XYS20060118)。PH-SA的工作浓
度是1~5 ug/ml，就是说，要稀释1000~200倍。4.6mg/ml的链霉素被稀释
1000~200倍，就是4.6~23 ug/ml。赵利军引用的文献里，链霉素的MICs是
32~64ug/ml。23 ug/ml的链霉素还没有达到链霉素最低抑MRSA菌所需的浓度，谈
不上对MRSA有杀菌作用。

　　是实验设计不佳，还是人为操作失误，还是有意造假？科学研究中出现的问
题，不是清官难断的家务事，是可以通过科学原理常识等来推导演绎的。既然是
学术争鸣打假，就应该让科学说话。

(XYS20060125)

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