◇◇新语丝(www.xys.org)(xys.dxiong.com)(xys.3322.org)(xys.xlogit.com)◇◇   新泰克公司关于丘小庆“造假事件”内部文件公开(二)   2005年2月1日新泰克公司在收到西藏药业对PH-SA的初步检测结果后,当日 由公司董事长程世平、副总经理姚庆等,在四川大学华西医院试验大楼向科研副 院长程惊秋递交了质疑文件。新泰克公司董事长程世平称:“PH-SA抗菌活性可 能是由链霉素引起的,这个问题相当严重,希望程院长严肃对待。当然,更希望 是我们弄错了。”程惊秋副院长说:“我们找丘小庆尽快了解。”并签收了该文 件。   NTC字(2005)第(05)号   关于抗菌多肽项目问题的情况反映   四川大学华西医院:   我司受让贵方的抗菌多肽项目在药学研究过程中发现一些不可逾越而严重的 问题。主要表现为:   一、无论是发明人制备的蛋白样品,还是根据发明人原始基因工程菌种按专 利及发明人指定工艺程序制备的蛋白,均含有较高链霉素(DNA沉淀时加入的), 该蛋白的生物杀菌活性始终与链霉素成正态分布关系。   二、发明人的原始基因工程菌种,按专利及发明人指定工艺流程制备的蛋白, 若干次重复结果均未见其目的蛋白的电脉主带,无法获得其目的蛋白。经查询分 析,发明人制备蛋白的质粒不适用于蛋白制备的表达使用。   上述问题,关系到贵方转让我司《抗菌多肽专利》的真实性问题,望贵方为 此高度重视。   特此反映。   (此页无正文)   [附:Ph-SA药学研究报告(部分)]   四川新泰克控股有限责任公司   二OO五年二月一日   PH-SA药学研究综述   一、蛋白表达与质粒   按照PH-SA授权专利上所述工艺流程,使用丘小庆实验室所构建的PH-SA的原 始基因工程菌种,通过多次进行表达抗金葡菌工程多肽的实验。经SDS-PAGE蛋白 电泳检测未见发明人的目的蛋白明显的蛋白条带,即未实现目的蛋白高效表达, 目的蛋白获得率极低。经查询分析,因为发明人使用promega公司出品的不用于 蛋白表达的名为pSELECT-1商用质粒所致。   二、原始菌种制备的PH-SA生物活性检测   使用丘小庆实验室的PH-SA的原始基因工程菌种,按照PH-SA授权专利上所述 工艺流程制备的抗金葡菌工程多肽,经过测定所得抗菌多肽含有一定量的链霉素 残留,将该抗菌多肽制备物与其链霉素残留量的等量纯链霉素做活性对比实验, 发现该抗菌多肽和其链霉素残留量的等量纯链霉素都具有一致的抗菌作用。   三、重构建菌种制备的PH-SA及生物活性检测   通过我公司重新构建基因工程菌,该工程菌经诱导后能高效表达目的蛋白, SDS-PAGE电泳能看见70000分子量左右的目的蛋白有明显的表达主带。经过对重 组质粒DNA序列测定和表达产物鉴定,与丘小庆专利表述产物一致。通过初步纯 化,能得到大量目的蛋白粗品(纯度>70%),经专利所述工艺得到的样品有一定 生物活性(经检测,发现含有硫酸链霉素残留);经过进一步纯化,能得到高纯 度的目的蛋白(纯度>95%),但同时也失去其生物活性(经检测,蛋白样品中已 没有硫酸链霉素残留)。   四、重构建菌种制备的PH-SA对抗菌素的增效实验   使用我公司重组的高效表达的基因工程菌种,按照PH-SA授权专利上所述工 艺流程(仅省去了加硫酸链霉素沉淀DNA这一过程,使样品中不含硫酸链霉素), 制备的蛋白PH-SA,对耐甲氧西林金葡菌(MRSA)没有表现出抗菌活性,且均没有观 察到PH-SA与苯唑西林钠、氨苄西林钠、头孢唑林钠、硫酸链霉素产生协同抗菌 作用。   西藏华西药业集团有限公司   2005年2月1日 (XYS20060120) ◇◇新语丝(www.xys.org)(xys.dxiong.com)(xys.3322.org)(xys.xlogit.com)◇◇