◇◇新语丝(www.xys.org)(xys.dxiong.com)(xys.3322.org)(xys.freedns.us)◇◇ 质疑易国华给方舟子的答复 作者：Lysor 唉，如果我是易博士，我早就闭嘴了。 1：“基因工程菌并非戴老师所说的“普通”大肠杆菌，因其含有质粒，而且PIII噬菌体载 体系统质粒拷贝数很低。” 实验室保存的大肠杆菌有多少没有质粒？都拿去菌株保存中心才行？pCANTAB5E是低拷贝质 粒嘛？复制元件是ColE1的，你自己说是不是吧，实在不行看《分子克隆》第二版第一面。 而且我还怀疑是衍生的ColE1，也就是pUC的，因为很多公司所说的ColE1 ori就是pUC ori 。说到低拷贝质粒，我到可以告诉你几个：BL21(DE3) pLysS菌株中的pLysS，用的p15A复 制元件；JM109菌株中的F'因子，以及衍生出的BAC载体，单拷贝。这些菌株很难保存吗？ 2：“对于小片段的回收，我用的是2%的低熔点琼脂糖” 我前两年也用过2％的低熔点琼脂糖，不过是回收150bp的片断，因为当时用的BioSTAR的 GlassMilk回收下限是200bp。Marker是华美产pBR322/MspI，琼脂糖是Sigma产。可惜的是我 找出那一张电泳图来实在看不到50bp左右的Marker带在哪里。当然，易博士可以用的东东 好一些，请问是什么牌子的？再说啦，这种PCR产物酶切了，要是我肯定不做回收，直接连 就是了，又没有什么问题。看了他的文章，我就怀疑他做这个试验没有？本来不需要做这 个回收，他们自己实验室的人也承认了。但是，没有做的东西就不要写，不然就是做假！ 3：“但直到现在，她们并没有重复实验并积极地在相关专业杂志上发表文章，或向JGV编 辑部反映情况她们已经证伪了。” 不才以为，重复这个实验有一个最大的障碍，那就是易博士首先是当今世界上唯一一个能 够做出对虾细胞空斑的人，然后才是世界上唯一一个能够用这个十肽抑制空斑的人。别人 连空斑都做不出，合成个十肽固然容易，但是怎么用这个十肽呢？就比如易博士的屠龙刀 ，别人学了也没用，因为找不到龙。所以，我觉得这个东东还是易博士重复比较好了那么 一点点。 4：还有那个电转化的问题易博士没有说。“The ligation mixture was transformed in to E. coli TG1 cells by electroporation using a Gene Pulser electroporation apparatus (Bio-Rad) at 2.5 kV, 200 ohms, 25 mF in 0.4 cm pre-chilled cuvettes.” 这个ligation mixture如果按易博士这个参数来弄，多半是一道闪电，当然啦，如果体积 >500ul，就只有一点水蒸汽了。但是脉冲时间肯定<4ms，也就是没有用。以上我用18M oh mes的纯水配合Fermentas的T4 ligase buffer试过。 另外一个问题没有试过，但是要请教，文献上说转化E coli需要的电场强度为12－18kv/cm， 只要不出现火花，强度越大，转化效率越高，所以做文库的人一般都会取上限，胆小的 取下限。可是您的电场强度只有下限的一半，帮主，也太低了吧。 只要做过电转化的人都可以知道，这个参数是胡说。 Fermentas T4 DNA Ligase（＃EL0335）的说明书：“It is necessary to extract DNA with chloroform and precipitate with ethanol prior to electrotransformation.” 黑体字，不是瞎子都看得见。 "Efficient Cloning and Electro-transformation of Large Eukaryotic DNA Fragments" http://www.bio-rad.com/LifeScience/pdf/Bulletin_1358.pdf "E. coli Pulser™ Transformation Apparatus Operating Instructions and App lications Guide" PAGE 8&22 http://www.bio-rad.com/cmc_upload/Literature/12864/M1652101C.pdf 我经常给新生说，只有高手才能做假，就比如沿海的假Nike，别人是OEM做真的起家的，要 是没这本事，还是好好学技术吧。看来易博士不是这样做假的人。 (XYS20031121) ◇◇新语丝(www.xys.org)(xys.dxiong.com)(xys.3322.org)(xys.freedns.us)◇◇